Identificação molecular e fenotípica de leveduras de importância clínica para autenticação em biobanco de leveduras
Resumo
A candidíase invasiva continua sendo prevalente causa de morbidade e mortalidade em pacientes imunocomprometidos. Nas últimas décadas, as tecnologias para identificação de leveduras (IdLev) têm avançado significativamente, com métodos bioquímicos automatizados e ensaios moleculares. A Espectrometria de Massas por Tempo de Voo (MALDI-TOF MS) tem se apresentado como uma alternativa promissora para a identificação na rotina de espécies de leveduras. O presente trabalho, teve como objetivo a comparação de metodologias moleculares e fenotípicas na IdLev. Foi selecionado o método de Castellani, para a manutenção e conservação dos microrganismos do Biobanco de Leveduras (BioBLev), tendo sido analisados 112 isolados, onde foi observado, dentre as espécies, as seguintes taxas de recuperação: C. tropicalis (27,7%), complexo C. albicans (21,6%), complexo C. parapsilosis (20,7%), complexo C. glabrata (16,2%), C. krusei (3,6%), C. haemuloni (1,8%). Dentre as espécies com o menor percentual de isolamento, foram encontradas: C. dubliniensis, C. famata, complexo C. guilliermondii, C. pelicullosa, C. utilis (0,9%) e outras espécies de leveduras (4,5%). Foi possível verificar o bom desempenho do MALDI-TOF MS frente aos métodos fenotípicos para a caracterização das leveduras assim como sua boa correlação com o PCR em tempo real. Por fim, foram elaborados os protocolos técnicos, formulários e um Compêndio de Métodos e de Boas Práticas em Coleção de Cultura de Leveduras. O presente estudo permitiu a recuperação de cepas de leveduras de interesse clínico para autenticação, através das metodologias fenotípicas e genotípicas e criação de um banco de microrganismos para atender às demandas de pesquisa do Instituto de Biologia do Exército.
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